Represión del gen PDS utilizando ribonucleoproteínas dCas9 en Chlamydomonas reinhardtii, en Centro de Investigación y Asistencia en Tecnología y Diseño del Estado de Jalisco (CIATEJ), Zapopan, Jalisco, México
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Fecha
2018-09
Autores
Zárate-Rivera, Ana K.
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Editor
ITESO
Resumen
Descripción
Diseño de un sistema de represión transcripcional basado en dCas9, para atenuar la expresión de pigmentos en las microalgas Chlamydomonas reinhardtii. Mediante análisis bioinformáticos se identificaron cuatro loci específicos de la proteína PDS, segundo paso de la conversión del precursor girofosfato de geranilgeranilo GGPP a carotenos. Buscando bloquear el inicio de la transcripción, se identificaron las regiones promotoras y sus elementos cis – regulatorios. Encontrando que dos loci en el cromosoma 12 están regidos bajo el mismo set de factores de transcripción. El diseño consta de dos complejos dCas9 bloqueando una región de -500 a -50 antes del primer exón. La transfección dCas9 propuesta busca enviar las proteínas dCas9 y sus guías sgRNA mediante electroporación a condiciones de 250 V por 8 ms. Experimentalmente, se activan cultivos suspendidos de Chlamydomonas reinhardtii cepa WT – CC – 120 comparando medio BBM contra medio TAP bajo microscopía. Los logros del proyecto se alcanzaron gracias a la dirección del Dr. Figueroa y al trabajo en colaborativo del equipo de biología sintética en cuestiones de bioinformática, además de las asesorías del Dr. Prasad como el trabajo en equipo con los estudiantes del laboratorio de biotecnología vegetal.
Palabras clave
Sustentabilidad y Tecnología, Apoyo a Centros de Investigación Externos