Expresión recombinante y caracterización de un vNAR biespecífico realizadas en el CIATEJ
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Fecha
2023-12
Autores
Espinoza-Sosa, Ramón E.
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Editor
ITESO
Resumen
Descripción
El PAP “Expresión y Caracterización de un vNAR Biespecífico” comenzó en el semestre de otoño de 2023. Se trabajó con dominios vNARs, los cuales tienen el potencial de ser utilizados en el tratamiento de diversas enfermedades, entre ellas las autoinmunes. Así, el objetivo general que se planteó fue el de establecer las condiciones de extracción y purificación de dos construcciones biespecíficas de vNARs de Heterodontus francisci clonados en Escherichia coli BL21 con potencial aplicación en el tratamiento de artritis reumatoide. A su vez, se establecieron cuatro objetivos específicos: obtener las proteínas
correspondientes a través de extracción con urea, analizarlas en geles de poliacrilamida y en electrotransferencia semi-seca, obtenerlas por medio de IMAC y generar un banco maestro de las clonas de E. coli BL21 productoras de estas.
Para la extracción se incubaron pastillas celulares en un buffer con urea para provocar su lisis. Para la purificación, primeramente se preparó una resina NiNTA y después esta se utilizó para purificar las proteínas mediante un gradiente de urea. La determinación del peso molecular se hizo con SDS-PAGE y la detección de la presencia se hizo con western blot con
transferencia semi-seca. El banco maestro se creó aislando colonias productoras de las construcciones y criopreservándolas en glicerol al 10%. La SDS-PAGE y el western blot revelaron que la extracción y la purificación fueron exitosas, por lo que se logró estandarizarlas parcialmente. Asimismo, se vio que ambas construcciones, en efecto, se expresan. A su vez, el banco maestro pudo crearse.
Palabras clave
Sustentabilidad y Tecnología, Apoyo a Centros de Investigación Externos