Estandarización de las condiciones de cultivo de dos cepas de E. coli para la obtención de una poliproteína multiepítopo en el CIATEJ sede Guadalajara
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Fecha
2023-07
Autores
González-Cisneros, José M.
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Editor
ITESO
Resumen
Descripción
El PAP “Estandarización de las condiciones de cultivo de dos cepas de E. coli para la obtención de una poliproteína multiepítopo” es parte de un proyecto que inició por mejorar el diagnóstico de las micobacterias patógenas para el ser humano y el bovino. Se abordó de objetivo lograr las condiciones óptimas de expresión de una proteína artificialmente diseñada mediante bioinformática para uso potencial en diagnóstico de la tuberculosis. Se buscó utilizar y cultivar una cepa de Escherichia coli transformada con el gen expresante de la proteína recombinante. Optimizar las condiciones experimentales para producir la proteína en cultivos bacterianos a pequeña escala. Además, separar el producto de los cultivos y determinar la presencia de la proteína recombinante por su tamaño y un marcador de histidina. Se trabajó con dos cultivos de E. coli expresantes de la proteína en dos vectores (pET-28a y pET-32), para determinar las mejores condiciones de expresión de la proteína. Se indujo la expresión de la proteína con diferentes temperaturas y tiempos de incubación. Se realizó el lisado y separación del producto a partir de los cultivos. Para observar la proteína, se hizo una electroforesis de proteínas complementada con una tinción con azul de Coomassie. Asimismo, se realizó una detección con anticuerpos específicos por medio de la técnica de Western blot. La experimentación permitió elaborar una metodología con las mejores condiciones de inducción, visualizando una proteína soluble. Habiendo parte del producto en la fracción precipitada debido a una sobre producción por ello mal plegamiento de la proteína.
Palabras clave
Sustentabilidad y Tecnología, Apoyo a Centros de Investigación Externos